Måling av bakteriegehalt i vann?
Roy Sigurd Karlsbakk
Hvordan kan jeg måle bakterieinnhold i vann? Trengs det mye avansert
utstyr, eller er det noe som kan gjøres enkelt?
roy
Royal
> Hvordan kan jeg måle bakterieinnhold i vann? Trengs det mye avansert
> utstyr, eller er det noe som kan gjøres enkelt?
Dette gjøres relativt enkelt. Man trenger sterile agarskåler, dvs
sterile petri-skåler med ca 1% agarose i et medium (dvs en blanding av
glukose, gjærekstrakt, kjøttbuljong, buljong av melkeproteiner, fosfat
etc i vann).
Det beste er å henvende seg til et laboratorium (lokal
veterinærmyndighet, mattilsyn) som lager slikt for sin egen analyse,
fordi 1) media fåes kjøpt helt eller delvis i ferdigblandet pulverform
klar for tilsetting av vann, 2) sterilisering påkrever f.eks en
autoklav som varmer opp mediet til 120 grader C i to timer under to
atmosfærers trykk, og 3) porsjonering av en skvett flytende agar ved
70 grader C til hver petri-skål må skje under sterile/aseptiske
forhold.
Når skålene er avkjølte og agaren størknet er disse klare til bruk.
Vannprøvene tynnes ut 1:100, 1:1000, 1:10000, osv med sterilt medium
og en passende mengde, f.eks 100 mikroliter, spres godt men forsiktig
utover overflaten av agaren i hver skål med et hensiktsmessig sterilt
redskap under sterile/aseptiske forhold, før lokket settes på. Under
ett eller to døgns inkubasjon ved romtemperatur eller i et varmeskap
ved 37 grader C vil hver bakterie formere seg i et antall så stort at
den danner en liten synlig koloni på agaren. Bakteriene i den
opprinnelige vannprøven finnes ved å telle kolonier.
Eksempel: 250 mikroliter vannprøve var fortynnet 1:5000 og 200
mikroliter av denne fortynningen dannet 78 kolonier på skålen;
opprinnelig antall bakterier i en milliliter vannprøve var derfor:
78/200*5000/250*1000 = 7800 bakterier/ml.
Se f.eks: http://www.disknet.com/indiana_biolab/b038.htm
royal
Roy Sigurd Karlsbakk
> On 8 Jul, 14:55, Roy Sigurd Karlsbakk <r...@karlsbakk.net> wrote:
>
>> Hvordan kan jeg måle bakterieinnhold i vann? Trengs det mye avansert
>> utstyr, eller er det noe som kan gjøres enkelt?
>
>
Synes ikke det hørtes så enkelt ut, jeg. Jeg fant en annen som virka
_mye_ lettere. Er dette bare vissvass?
http://miljolare.no/aktiviteter/vann/ressurs/vr14/?vis=veiledning
roy
Bjørn Oddvar Strøm
Burde funke som bare rakkern, det, bare du får tak i de filmene (og
sterile pipetter).
Er for så vidt samme prinsipp som i forrige post, bare et enklere
praktisk system..
-b-
Royal
> Royal skrev:
> >
> > Dette gjøres relativt enkelt.<snip/>
>
> Synes ikke det hørtes så enkelt ut, jeg. Jeg fant en annen som virka
> _mye_ lettere. Er dette bare vissvass?http://miljolare.no/aktiviteter/vann/ressurs/vr14/?vis=veiledning
>
Det er nok vissvass, fordi du kommer til å oppdage at prosedyren er
nøyaktig den samme som den jeg har beskrevet.
På nettsiden som du lenker til står det: "I dette forsøket vil vi
dyrke bakterier fra vann på en næringsfilm som kalles petrifilm."
Petrifilm erstatter petriskåler, men bruken av begge bygger på samme
prinsipp: dyrking av bakterier på en overflate av fast næringsmedium
inntil synlige kolonier kan telles. Petrifilm kan betraktes som
"ferdiglagede petriskåler". Men regn med at dette koster flesk.
royal
Roy Sigurd Karlsbakk
Virker ganske svinedyrt, ja,
http://miljolare.no/aktiviteter/vann/ressurs/vr14/bestilling/index.php
Petrifilm (3M) kr 4,50 per stykk
Sterile engangspipetter kr 2,0 per stykk
Karl Erik Birkeland
> Hvordan kan jeg måle bakterieinnhold i vann? Trengs det mye avansert
> utstyr, eller er det noe som kan gjøres enkelt?
Hva mener du med "bakterieinnhold"? Du har fått en del forslag her, men
ingen av disse vil vise deg absolutt alle former for bakterier som kan
finnes i vannet... Valg av dyrkingsmedium, tilgang på oksygen (aerob
eller anaerob dyrking), dyrkingstemperatur og inkuberingstid (osv.) vil
kunne gi ulik vekst, men alle disse vil bare gi deg et visst utvalg av
bakteriene som måtte finnes i vannet.
Ved mikrobiologisk analyse av drikkevann er det vanlig å benytte
heterotroft kimtall ved 22 °C som en indikator for den dyrkbare
forekomsten av lett nedbrytbart organisk stoff. Ved slik dyrking støpes
en avmålt mengde vann inn i en steril agar (prøvematerialet blandes inn
mens agaren fremdeles er flytende). Skålene inkuberes ved 22 °C i 72
timer før antall synlige kolonier telles. Både bakterier og sopp gir
opphav til kolonier.
Tilsvarende benyttes heterotroft kimtall ved 37 °C (etter dyrking i 24
timer) som en indikator for den dyrkbare forekomsten av bakterier som
ikke har naturlig tilhold i vann. Standarden for kimtallsbestemmelse er
NS-EN ISO 6222. Utstyrsbehovet er forholdsvis moderat - du må kunne
lage steril agar og ha sterile pipetter og dyrkingsskåler.
For å bedømme om drikkevann er hygienisk tilfredsstillende er det vanlig
å lete etter fekale indikatorbakterier. Det er ikke vanlig å undersøke
vannet for forekomst av spesifikke patogener, da mangfoldet av patogene
organismer vil gjøre slike undersøkelser for tid- og ressurskrevende.
En ideell fekal indikatorbakterie skal ikke ha andre reservoarer enn
tarminnhold og feces. Indikatorbakterien bør dessuten være mulig å
påvise i en vannprøve så lenge den fekale forurensingen kan utgjøre en
smittemessig risiko.
I Norge er det vanligst å benytte gruppene koliforme bakterier (KB) og
termotolerante koliforme bakterier (TKB) som fekale indikatorbakterier.
Den klassiske metoden for å kvantifisere disse er å filtrere en kjent
vannmengde (typisk 100 ml) gjennom et sterilt cellulosefilter. Dette
filteret overføres deretter til en "selektiv agar" som kun tillater
vekst av bakteriene man er ute etter. Disse analysene er definerte i
Norsk Standard NS 4788 og NS 4792. Det er påkrevd med spesialutstyr
(steriliserbare filterholdere, vakumsug etc) for å gjøre slike analyser.
Mer moderne er det å benytte "hurtigmetoder", den mest vanlige er ulike
varianter av Colilert (http://www.idexx.com/water/colilert/). Man
trenger da svært lite spesialutstyr, dersom man kun ønsker å teste for
forekomst av koliforme bakterier og E. coli kan man nøye seg med en
inkubator og en UV-lampe. Reagensen og analyseutstyret (engangs)
leveres sterilt og klart til bruk fra leverandøren. Utstyrskostnaden
blir relativt høy per prøve, men det er minimalt med manuelt arbeid, og
man trenger lite spesialutstyr. Skal man kvantifisere (telle)
bakteriemengden må man derimot ha spesielle tellebrett (Quanti-Tray) som
koster skjorta og krever spesielt forseglingsutstyr.
Noen anbefalte deg å sende vannprøver til lokal veterinærmyndighet eller
Mattilsynet (som er samme etat). Da Mattilsynet ble opprettet i 2004
ble alle laboratoriene skilt ut, disse er nå selvstendige private
bedrifter. De fleste steder har man ikke så mange laboratorier å velge
mellom, http://www.gulesider.no/gs/categoryList.c?q=laboratorium er et
greit utgangspunkt.
--
Karl Erik Birkeland, MDNV