stabilité d'un tampon acetate de sodium.
carre
Je travail dans un labo de bio et je suis amené à préparer du tampon
acétate de sodium à ph 5 pour une réation imuno-enzymatique (EIA) qui
fait intervenir le N'N diméthylcarbazol comme subtrat de l'enzyme.
Pour ce je doit au préalable préparer le tampon acétate de sodium
(ph=9) que je raméne à ph=5 par ajout de HCl 35 % à l'aide d'un ph
métre.
Etant donné que je travail dans un labo BPL la préparation de ce
tampon demande beaucoup de temps.
Aussi je me demande s'il ne serai pas possible de préparer à l'avance
le tampon acétate à ph 5 pour pouvoir le conserver plusieur mois?
La concentration final en acétate de sodium dans le tampon est
d'environ 6 g/l.
L'acétate de sodium est commandé chez SIGMA.
Toujour dans le cadre des BPL (si le tampon acétate peut ce
conserver?); le fournisseur peut-il me fourmir des informations
relative à ca conservation?
merci
Bernard LAMY
> bonjour;
>
> Je travail dans un labo de bio et je suis amené à préparer du tampon
> acétate de sodium à ph 5 pour une réation imuno-enzymatique (EIA) qui
> fait intervenir le N'N diméthylcarbazol comme subtrat de l'enzyme.
> Pour ce je doit au préalable préparer le tampon acétate de sodium
> (ph=9) que je raméne à ph=5 par ajout de HCl 35 % à l'aide d'un ph
> métre.
Une solution plus propre consiste à ajouter de la soude à l'acide
acétique, ce qui évite l'introduction des ions chlorure. Dans la même
optique, on peut également descendre le pH de l'acétate de sodium avec
de l'acide acétique.
> Etant donné que je travail dans un labo BPL la préparation de ce
> tampon demande beaucoup de temps.
??!! La première fois peut-être, pour avoir une idée du rapport des
volumes en fonction des normalités, après ça ne devrait pas prendre plus
de quelques minutes.
> Aussi je me demande s'il ne serai pas possible de préparer à l'avance
> le tampon acétate à ph 5 pour pouvoir le conserver plusieur mois?
Sera-ce toujours en accord avec les BPL ? Sinon vous pouvez toujours en
préparer une solution 10 ou 100 plus concentrée que la solution de
travail. Puis diluer la solution mère au moment de l'emploi pour avoir
la solution de travail en ajustant le pH de cette dernière si besoin
est. Mais encore une fois sera-ce toujours en accord avec les BPL ?
> si le tampon acétate peut ce conserver?
Du moment que vous bouchez bien le flacon, vous pouvez à la rigueur
filtrer la solution sur 0,2 µm, elle ne devrait pas bouger.
Salutations.
--
bernard53CHEZmacPOINTcom
Pour une réponse par mail remplacer les deux mots en majuscules par les
deux caractères qui vont bien.
salach frederic
>
> Sera-ce toujours en accord avec les BPL ? Sinon vous pouvez toujours en
> préparer une solution 10 ou 100 plus concentrée que la solution de
> travail. Puis diluer la solution mère au moment de l'emploi pour avoir
> la solution de travail en ajustant le pH de cette dernière si besoin
> est. Mais encore une fois sera-ce toujours en accord avec les BPL ?
C'est une solution, il suffit :-) de valider la stabilité de la solution
et comme ça ce sera en accord avec les BPL.
Fred
chm
j'aimerais savoir comment sa fonctione un tampon, et comment doit on le
placer par rapport au reactif.
aussi si il fo respecter certaine qté?
"carre" <carre....@libertysurf.fr> a écrit dans le message news:
f8ef306f.03041...@posting.google.com...
Jean-Yves Bertrand
tampax... quoique !
1) La définition d'un tampon pH, c'est de maintenir le pH d'une solution
(pratiquement) constant malgré des ajouts de base ou d'acide...
Donc, ramener un tampon pH 9 à un pH 5 par ajout d'acide (même fort), outre
le fait d'être un peu con-con, va demander pas mal de ml d'acide (donc ce
sera long et/ou dangereux car H+ + OH- ---> H2O est exothermique !)
2) Comment ça marche ?
On utilise un acide faible et sa base conjuguée, par exemple AcOH/AcO- (ou
une base faible et son acide conjugué, i.e. NH3/NH4+) ;
si vous étudiez leur courbe de neutralisation par une base forte : NaOH pour
AcOH (ou un acide fort : HCl pour NH3), vous verrez qu'il y a une zone ou le
pH varie très peu avec le volume de base forte (ou d'acide fort) ajouté : le
pH médian correspond au pH du tampon et au rapport AcOH/AcO- (ou NH3/NH4+) à
utiliser.
3) exemples de tampon : acide acétique/acétate et ammoniac/ammonium donc,
acide borique, phosphorique et leurs sels de sodium, amines, etc.
4) Remarques :
L'eau est un mauvais tampon : de pH 7 on diminue (ou accroît) très vite le
pH en ajoutant un peu d'acide (ou de base) ; c'est parce que H+ est un acide
fort (OH- une base forte)...
Ajouter un acide faible (donc non complètement dissocié) à un tampon pH 9 va
augmenter le volume d'acide nécessaire ; de plus, ajouter AcOH à un tampon
AcOH/AcO- pour le neutraliser n'est pas fûte-fûte car cela va modifier le
rapport AcOH/AcO- du tampon, donc ses propriétés...
Si l'on doit absolument passer d'un tampon pH 9 à un pH de 5, autant
utiliser un acide fort (HCl) pour réduire la quantité d'acide à ajouter
(mais prudence à la neutralisation) ; il arrive que des réactions doivent
avoir lieu à un certain pH (tampon pH 9) puis que l'on doive repasser en
milieu acide (pH 5) pour effectuer d'autres réactions : dans ce cas, il faut
bien tout prévoir pour ne pas se retrouver à devoir rajouter 1 l d'HCl 4 N
dans un volume de 100 ml parce que l'on aura été trop généreux en tampon pH
9 !
"carre" <carre....@libertysurf.fr> a écrit dans le message de news:
f8ef306f.03041...@posting.google.com...
salach frederic
> J'ai l'impression que personne ne sait au juste ce qu'est un tampon pH - pas
> tampax... quoique !
>
> 1) La définition d'un tampon pH, c'est de maintenir le pH d'une solution
> (pratiquement) constant malgré des ajouts de base ou d'acide...
>
> Donc, ramener un tampon pH 9 à un pH 5 par ajout d'acide (même fort), outre
> le fait d'être un peu con-con, va demander pas mal de ml d'acide (donc ce
> sera long et/ou dangereux car H+ + OH- ---> H2O est exothermique !)
Je pense que le problème et de fabriquer un tampon pH 5 à partir d'une
solution d'acétate à pH 9. Donc la démarche pratique et d'ajouter de
l'acide acétique à la solution sous contrôle pH mètre.
La solution d'acétate de sodium qui est à pH 9 n'est pas un tampon par
contre à pH 5 (pka CH3COOH/CH3COO- = 4.75) oui.
Il faut mieux ajouter CH3COOH que HCl car comme le fait remarquer très
justement Bernard ce dernier apporte des ion Cl- pouvant perturber les
réactions (normalement non... mais cela dépend de la réaction en cas de
modification de l'activité enzymatique par ex)
Pour ce qui est de la réaction exothermique faut quand même pas exagéré,
c'est loin d'être comme H2SO4 dans H2O.
>
--
Fred