practica 2 : Acción de la amilasa sobre el almidón

[erick emmanuel cepeda galindo]

introducción:
Las enzimas son catalizadores proteicos que aceleran la velocidad de
las reacciones metabólicas que ocurren tanto a nivel celular como
fuera de ellas, sin sufrir ellas cambios en su estructura. Para el
proceso de digestión , las biomoléculas ingeridas en la dieta deben
ser degradadas a sus componentes más sencillos para ser absorbidas a
nivel del tubo digestivo y así llegar al lugar correspondiente a nivel
celular donde participarán en diversos procesos metabólicos
indispensables para el mantenimiento de una adecuada homeostasis.La
digestión de los carbohidratos comienza en la boca, donde los
alimentos se mezclan con la Amilasa salival que degrada los enlaces
del almidón liberándose Maltosa, Glucosa y dextrinas de almidón que
poseen todos los enlaces.La acción de las enzimas, por sus
características físico-químicas, pueden afectarse por la condiciones
presentes en el lugar de acción de éstas. Entre los principales
factores que pueden modificar la acción enzimática tenemos:

a. La temperatura:
Todas las enzimas muestran cierta termolabilidad, aunque para muchas
de ellas el aumento de la temperatura, hasta cierto límite, acelera la
velocidad de la reacción. Sin embargo, por que la mayoría de éstas son
estructuras proteicas , pueden ser desnaturalizadas a medida que se
aumenta la temperatura y así perder su actividad biológica. La
temperatura a la cual se observa la máxima actividad enzimática se
denomina Temperatura Óptima.

b. El pH:
Por su característica proteica, muchas enzimas por el pH de donde se
encuentran pueden cambiar desde un estado ionizado ( Con carga ) a uno
no ionizado ( sin carga), afectando así la actividad biológica de las
mismas.
Cada enzima posee un pH característico donde puede realizar su función
( pH óptimo), cualquier variación del mismo puede afectar la acción
enzimática y así afectar la velocidad de las reacciones químicas.

c. Inductores e inhibidores:
Existen sustancias químicas que pueden afectar la interacción del
sustrato y la enzima, ya sea aumentando la actividad enzimática
( Inductores ) o disminuyéndola ( Inhibidores).
Los inhibidores tienen gran utilidad en bioquímica, ya que ayudan a
determinar la especificidad de la enzima por el sustrato, la
naturaleza de los
grupos funcionales en el mantenimiento de la estructura activa de la
enzima. Estos compuestos no son alterados químicamente por la enzima.
De acuerdo al tipo de inhibición que ejerzan éstas sustancias, se han
clasificado en :
• Inhibidores Reversibles.
• Inhibidores Irreversibles

objetivos:
poder observar como actua la amilasa (la saliva) como catalizador
sobre el almidon, y entender como es que este proseso se relaciona con
la digestion

.Material:

Papel filtro
Embudo
5 tubos de ensayo
2 goteros
2 cápsulas de porcelana

Material biológico:

Muestra de saliva
Sustancias:
Agua destilada
Almidón
Reactivo de Benedict
Reactivo de Lugol para almidón
Equipo:
Balanza granataria electrónica
Parrilla con agitador magnético

Procedimiento:

A. Obtención de la enzima amilasa
Después de enjuagar la boca, mastica un trozo de papel filtro para
estimular la salivación. Los líquidos segregados se van pasando a un
embudo que tenga un papel filtro, el filtrado se coloca en un tubo de
ensayo hasta obtener 1 ml.
La saliva así obtenida se diluye empleando 1ml de saliva y 10 ml de
agua destilada, así se obtiene la preparación de enzima base.
Se prepara una solución al 2% de almidón, para lo cual se pesan 2 g de
almidón y se disuelven en 100 ml de agua destilada
Se colocan 2 ml de agua destilada en un tubo de ensayo se le agregan 2
ml de la solución de almidón al 2% y 2 ml de la solución base de la
enzima. En otro tubo se colocan 2 ml de agua destilada y se le agregan
2 ml de la solución de almidón al 2%.
Los tubos se colocan en baño maría a 37° C, durante 15 minutos
dejando que la amilasa vaya hidrolizando al almidón
Una vez transcurridos los 15 minutos se sacarán los tubos del baño
maría y se harán las pruebas del lugol y Benedict
B. Reacciones de lugol para almidón y Benedict
La prueba del yodo o el lugol permite identificar la presencia de
almidón, con este reactivo se obtiene un color azul-violeta
característico. Toma 1 ml de la disolución de cada uno de los tubos y
añade unas gotas de lugol a cada una de ellas. Si no existe la
hidrólisis del almidón la prueba será positiva.
La prueba de Benedict permite identificar a los azucares reductores.
Toma 1 ml de cada uno de las disoluciones de los tubos y agrégales 1
ml del reactivo de Benedict, enseguida coloca ambos tubos en baño
María, si existe hidrólisis del almidón se formará un precipitado rojo
ladrillo que indica la presencia de azúcares como la glucosa y la
maltosa